高效液相色譜法測定7-氨基頭孢烷酸含量

一、7-氨基頭孢烷酸簡介：

   7-氨基頭孢烷酸(7ACA)是很重要的頭孢原料藥中間體。其分子結構(見圖1)。在其生產過程中，除主要的組份7ACA外。還含有少量的去乙酰7-氨基頭孢烷酸(D-7ACA)、去乙酰氧72氨基頭孢烷酸(DO-7ACA)、頭孢烷酸(CPC)。成都科捷應用研究所采用反相高效液相色譜法分離測定了7ACA的含量及其有關物質，在較短時間內完成分離測定，重復性、精密度及可靠性良好,可用于該品的質量控制。
 
二、LC-10Tvp梯度高效液相色譜儀配置
LC-10Tvp高壓恒流泵：2臺
SPD-10Tvp紫外檢測器：1臺
SCL-10Tvp 系統控制器：1臺
7725i手動進樣閥： 1套
色譜工作站：1套    （VI2010、N2000、N3000選用）
液相色譜柱：1支     （C18 4.6*250mn,5um）
微量進樣器：1支     （50ul/100ul）
   進樣支架  ：1只     （進樣閥用）
三、LC-10Tvp梯度高效液相色譜儀特點
LC-10Tvp梯度高效液相色譜儀是成都科捷分析儀器有限公司為了快速地滿足多樣化的客戶需求，在原有的STI501液相色譜儀的基礎上經過優化，利用美G先進技術開發設計，G內加工生產的的一款新型的液相色譜儀。LC-10Tvp等度高效液相色譜儀實現了人機對話，可實時對儀器的運行狀態進行監控，并可對潛在和已出現的故障做出判斷，同時提供在線解決方案。該儀器也全面實現了遠程的準無人操作，大大提高了儀器的使用效率，同時通過高精度的AS1000自動進樣系統，實現自動化進樣，**大程度抑制了樣品的交叉污染，提供樣品分析精度。LC-10Tvp等度高效液相色譜儀可廣泛應用于研究開發、醫藥檢驗、食品檢測、化工分析、環境監測等眾多分析*域。
 
主要特點
    豐富的功能——符合客戶對分析的不同需求
    硬件具有VP功能，記錄維護信息和操作記錄，符合GLP/GMP要求；系統控制器增具有時鐘、溫度計、濕度計等人性化設計的功能。
    **的性能——滿足客戶對儀器的嚴格要求
    檢測器采用進口氘燈、光電池以及1200條/mm凹面光柵組成的雙光束單色器；精密加工的雙透鏡流通池，控制波長調節的高精度微處理器以及雙路高速的采樣頻率，確保了低噪聲、低漂移及超高靈敏度等特點。
    VI2010工作站符合多種法規要求。
    可靠的結果——滿足客戶對結果的準確要求
    與進口儀器做對比試驗,分析結果具有高度的一致性。
    簡便的操作——便于客戶對軟件的熟練操作
    軟件采用多窗口模式，操作方便。
    精美的外觀——滿足客戶對儀器的視覺要求
    外形精美，帶來視覺上的享受。
技術指標

LC-10Tvp高壓恒流輸液泵
輸液方式	微體積串聯雙柱塞
**大輸液壓力	0～9999Psi
流量設定范圍	0.001～9.999ml/min   （以0.001ml/min步長調節流量）
流量設定值誤差	≤0.5%
流量穩定性誤差	≤0.2%RSD
壓力脈動	小于15Psi   （流量1mL/min，壓力600～1600Psi 。）
泵密封性	壓力為5400Psi，時間為10min，壓降小于400Psi 。
時間程序功能	有
尺寸	W260×H130×D420mm
重量	11kg
使用環境溫度范圍	4～40℃
SPD-10Tvp紫外可見可變波長檢測器
波長范圍	190nm～700nm
波長示值誤差	≤±1nm
波長重復性誤差	≤±0.1nm
動態噪聲	≤ ±0.75×10-**U  （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。）
靜態噪音	≤ ±0.5×10-**U  （空池，響應時間1秒，20℃ 。）
動態基線漂移	≤±1×10-4AU/h   （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。）
靜態基線漂移	≤0.5×10-4  （空池，響應時間1秒，20℃ 。）
線性范圍	≥104
**小檢測濃度	≤1×10-9g/mL  （萘/甲醇溶液）
定性重復性	RSD6≤ 0.1%
定量重復性	RSD6≤ 0.5%
光譜帶寬	6nm
流通池體積	8μL
光程	10mm
時間程序功能	有
尺寸	W260×H130×D420mm
重量	11kg
使用環境溫度范圍	4～40℃

 #p#分頁標題#e#
四、高效液相色譜法測定7-氨基頭孢烷酸含量檢測方法
1　儀器與試劑
成都科捷LC-10Tvp高效液相色譜儀
瑞士梅特勒AG245電子天平(十萬分之一)
PHS225酸度計(上海雷磁儀器廠)
超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)
Milli-Q純水器(Millipore)
乙腈為色譜純試劑(德GMerck公司)
醋酸鈉、冰醋酸均為分析純試劑。
7ACA、D27ACA、DO27ACA、CPC對照品均由意大利進口,其中7ACA含量為96.1%,批號392001029。
2　色譜條件　
色譜柱:C18色譜柱(416mm×250mm,5um);
流動相:0.02mol/L醋酸鈉(用醋酸調pH**5.5)2乙腈(930∶70);柱溫:35℃,樣品池溫度:8℃;檢測波長:263nm;流速:0.7mL?min-1;進樣量:10uL
3　實驗方法與結果
3.1　系統適用性試驗　
在該色譜條件下混合對照品及樣品色譜圖(見圖2、3)。從圖中可以看出,各峰之間均達到基線分離,且樣品各峰的保留時間同對照品各峰的保留時間一致。
 

3.2　線性關系　精密稱取7ACA對照品適量,加流動相溶解定容后配成2mg/mL的儲備液，分別取儲備液用流動相稀釋成40、120、160、200、240、280、360ug/mL的溶液，各進樣10uL,記錄峰面積，以峰面積y對濃度x(ug/mL)作線性回歸，得回歸方程:y=34960x-107535，r=0.9999，表明在40～360ug/mL范圍內線性關系良好
3.3　樣品測定　取本品約20mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋**刻度，搖勻，取10uL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取對品適量,同法測定，按外標法以峰面積計算供試品中的7ACA含量，以峰面積歸一法計算有關物質的含量，結果(見表)。
 
 
五、高效液相色譜法測定7-氨基頭孢烷酸含量結果
根據上述資料表明，成都科捷應用研究所研發的方法簡便、快速，靈敏度高，專一性強，線性范圍廣，回收率良好，流動相便宜?？勺鰹?-氨基頭孢烷酸含量及其有關物質的測定方法，為中間體的質量控制提供了參考。